형광 필터는 형광 현미경의 필수 구성 요소입니다. 일반적인 시스템에는 여기 필터, 방출 필터 및 이색성 거울의 세 가지 기본 필터가 있습니다. 그룹이 현미경에 함께 삽입되도록 일반적으로 큐브에 포장됩니다.

형광 필터는 어떻게 작동하나요?
여기 필터
여기 필터는 특정 파장의 빛을 투과시키고 다른 파장은 차단합니다. 한 가지 색상만 통과하도록 필터를 조정하여 다양한 색상을 생성하는 데 사용할 수 있습니다. 여기 필터는 긴 통과 필터와 대역 통과 필터의 두 가지 주요 유형으로 제공됩니다. 여기기는 일반적으로 형광단에 의해 흡수된 파장만 통과시켜 다른 형광원의 여기를 최소화하고 형광 방출 대역의 여기광을 차단하는 대역 통과 필터입니다. 그림에서 파란색 선으로 표시된 바와 같이 BP는 460-495로, 460-495nm의 형광만 통과할 수 있다는 의미입니다.
이는 형광 현미경의 조명 경로 내에 배치되며 형광단 여기 범위를 제외한 광원의 모든 파장을 필터링합니다. 필터 최소 투과율은 이미지의 밝기와 밝기를 결정합니다. 전송이 이상적으로 85%를 초과하도록 모든 여기 필터에 대해 최소 40% 전송이 권장됩니다. 여기 필터의 대역폭은 필터의 중심 파장(CWL)이 형광단의 피크 여기 파장에 가능한 한 가까워지도록 형광단 여기 범위 내에 있어야 합니다. 여기 필터 광학 밀도(OD)는 배경 이미지의 어두움을 나타냅니다. OD는 필터가 전송 범위 또는 대역폭 외부의 파장을 얼마나 잘 차단하는지를 측정한 것입니다. 최소 OD 3.0이 권장되지만 OD 6.0 이상이 이상적입니다.

방출 필터
방출 필터는 샘플의 원하는 형광이 검출기에 도달하도록 하는 목적으로 사용됩니다. 더 짧은 파장을 차단하고 더 긴 파장에 대해 높은 투과율을 갖습니다. 필터 유형은 숫자와도 연관되어 있습니다(예: 그림의 BA510IF(간섭 차단 필터)). 해당 지정은 최대 투과율의 50%에 있는 파장을 나타냅니다.
여기 필터에 대한 동일한 권장 사항이 방출 필터(최소 전송, 대역폭, OD 및 CWL)에도 적용됩니다. 이상적인 CWL, 최소 투과율 및 OD 조합을 갖춘 방출 필터는 가장 깊은 차단 기능으로 가장 밝은 이미지를 제공하고 가장 희미한 방출 신호를 감지합니다.
이색성 거울
이색성 거울은 여기 필터와 방출 필터 사이에 45° 각도로 배치되어 여기 신호를 형광단 쪽으로 반사하는 동시에 방출 신호를 검출기로 전송합니다. 이상적인 이색성 필터와 빔 스플리터는 최대 반사와 최대 투과 사이의 급격한 전환을 가지며 여기 필터 대역폭의 경우 >95% 반사, 방출 필터 대역폭의 경우 >90% 투과율을 갖습니다. 미광을 최소화하고 형광 이미지 신호 대 잡음비를 최대화하려면 형광단의 교차 파장(λ)을 염두에 두고 필터를 선택하십시오.
이 그림의 이색성 거울은 DM505입니다. 505나노미터가 이 거울의 최대 투과율의 50%에 해당하는 파장이기 때문에 이러한 이름이 붙었습니다. 이 거울의 투과율 곡선은 505nm 이상에서는 높은 투과율을 보이고, 505nm 왼쪽에서는 투과율이 급격히 떨어지며, 505nm 왼쪽에서는 최대 반사율을 나타내지만 여전히 505nm 미만에서는 투과율이 일부 나타날 수 있습니다.
롱 패스 필터와 밴드 패스 필터의 차이점은 무엇입니까?
형광 필터는 LP(Long Pass)와 BP(Band Pass)의 두 가지 유형으로 나눌 수 있습니다.
Long pass 필터는 긴 파장은 투과시키고 짧은 파장은 차단합니다. 컷온 파장은 피크 투과율의 50%에서의 값이며, 컷온 위의 모든 파장은 장대 통과 필터에 의해 투과됩니다. 이는 이색성 거울 및 방출 필터에 자주 사용됩니다. Longpass 필터는 응용 분야에서 최대 방출 수집이 필요한 경우와 스펙트럼 식별이 바람직하지 않거나 필요하지 않은 경우 사용해야 합니다. 이는 일반적으로 배경 자가형광 수준이 상대적으로 낮은 표본에서 단일 방출 종을 생성하는 프로브의 경우입니다.
대역 통과 필터는 특정 파장 대역만 투과시키고 다른 대역은 차단합니다. 이는 형광단 방출 스펙트럼의 가장 강한 부분만 전송되도록 하여 누화를 줄이고, 자가형광 노이즈를 줄여서 긴 통과 필터가 제공할 수 없는 높은 배경 자가형광 샘플의 신호 대 잡음비를 향상시킵니다.
BestScope는 몇 가지 유형의 형광 필터 세트를 공급할 수 있습니까?
일반적인 유형의 필터에는 파란색, 녹색 및 자외선 필터가 포함됩니다. 표에 표시된대로.
필터 세트 | 여기 필터 | 이색성 거울 | 배리어 필터 | LED 램프 파장 | 애플리케이션 |
B | BP460-495 | DM505 | BA510 | 485nm | ·FITC: 형광항체법 ·아시딘 오렌지: DNA, RNA ·오라민: 결핵균 ·EGFP, S657, RSGFP |
G | BP510-550 | DM570 | BA575 | 535nm | ·Rhodamine, TRITC: 형광항체법 ·요오드화프로피듐: DNA ·RFP |
U | BP330-385 | DM410 | BA420 | 365nm | ·자동형광관찰 ·DAPI: DNA 염색 ·Hoechest 332528, 33342: 염색체 염색에 사용 |
V | BP400-410 | DM455 | BA460 | 405nm | ·카테콜아민 ·5-하이드록시트립타민 ·테트라사이클린: 골격, 치아 |
R | BP620-650 | DM660 | BA670-750 | 640nm | ·Cy5 ·알렉사 플루어 633, 알렉사 플루어 647 |
형광 획득에 사용되는 필터 세트는 가장 많이 사용되는 형광단을 기반으로 하는 형광 응용 분야에 사용되는 주요 파장을 중심으로 설계되었습니다. 이러한 이유로 DAPI(파란색), FITC(녹색) 또는 TRITC(빨간색) 필터 큐브와 같이 이미징용으로 사용되는 형광단의 이름을 따서 명명되기도 합니다.
필터 세트 | 여기 필터 | 이색성 거울 | 배리어 필터 | LED 램프 파장 |
FITC | BP460-495 | DM505 | BA510-550 | 485nm |
DAPI | BP360-390 | DM415 | BA435-485 | 365nm |
TRITC | BP528-553 | DM565 | BA578-633 | 535nm |
FL-오라민 | BP470 | DM480 | BA485 | 450nm |
텍사스 레드 | BP540-580 | DM595 | BA600-660 | 560nm |
m체리 | BP542-582 | DM593 | BA605-675 | 560nm |

형광 필터는 어떻게 선택하나요?
1. 형광 필터를 선택하는 원리는 형광/방출광이 이미징 끝을 최대한 통과하도록 하고 동시에 여기광을 완전히 차단하여 가장 높은 신호 대 잡음비를 얻는 것입니다. 특히 다광자 여기 및 내부 전반사 현미경을 적용할 경우 약한 노이즈는 이미징 효과에 큰 간섭을 일으키므로 신호 대 노이즈 비율에 대한 요구 사항이 더 높습니다.
2. 형광단의 여기 및 방출 스펙트럼을 파악합니다. 검은색 배경의 고품질 고대비 이미지를 생성하는 형광 필터 세트를 구성하려면 여기 및 방출 필터는 형광단 여기 피크 또는 방출에 해당하는 영역에서 통과 대역 리플을 최소화하면서 높은 투과율을 달성해야 합니다.
3. 형광필터의 내구성을 고려하세요. 이러한 필터는 "소진"을 초래할 수 있는 자외선(UV) 광을 생성하는 강렬한 광원, 특히 조명 광원의 전체 강도에 노출되는 엑사이터 필터의 영향을 받지 않아야 합니다.
다양한 형광 샘플 이미지


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게시 시간: 2022년 12월 9일